Trước khi được bổ nhiệm giữ chức Thứ trưởng Bộ Tư pháp, ông Mai Lương Khôi đã trải qua các chức vụ: lãnh đạo Phòng Công chứng số 1 TPHCM, lãnh đạo Phòng Thi hành án dân sự TPHCM, Giám đốc Trung tâm Đấu giá TPHCM, Phó Giám đốc Sở Tư pháp TPHCM, Phó Tổng cục trưởng Tổng cục Thi hành án dân sự, Tổng cục trưởng Tổng cục Thi hành án dân sự, Bộ Tư pháp.
